Como fazer uma solução tampão de fosfato

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O objetivo de uma solução tampão é ajudar a manter um pH estável quando uma pequena quantidade de ácido ou base é introduzida em uma solução. Uma solução tampão de fosfato é útil amortecedor ter por perto, especialmente para aplicações biológicas. Como o ácido fosfórico tem várias constantes de dissociação, você pode preparar tampões de fosfato perto de qualquer um dos três pHs, que estão em 2,15, 6,86 e 12,32. O tampão é mais comumente preparado usando fosfato monossódico e sua base conjugada, fosfato dissódico.

Materiais Tampão Fosfato

• Fosfato monossódico
• Fosfato dissódico
• Água
• Ácido fosfórico para tornar o pH mais ácido ou hidróxido de sódio para tornar o pH mais alcalino
• medidor de pH
• Vidraria
• Placa de aquecimento com barra de agitação

Prepare o tampão de fosfato

1. Decidir sobre a concentração do tampão. Se você preparar uma solução tampão concentrada, poderá diluí-la conforme necessário.
2. Decida o pH para o seu tampão. Este pH deve estar dentro de uma unidade de pH do pKa do ácido/base conjugada. Então, você pode preparar um tampão em pH 2 ou pH 7, por exemplo, mas pH 9 seria empurrando-o.
3. Use o Henderson-Hasselbach equação para calcular quanto ácido e base você precisa. Você pode simplificar o cálculo se fizer 1 litro de tampão. Selecione o valor de pKa mais próximo do pH do seu tampão. Por exemplo, se você quiser que o pH do seu buffer seja 7, use o pKa de 6,9: pH = pKa + log ([Base]/[Acid])
   razão de [Base]/[Ácido] = 1,096
   A molaridade do tampão é a soma das molaridades do ácido e base conjugada ou a soma de [Ácido] + [Base]. Para 1M amortecedor (selecionado para facilitar o cálculo), [Acid] + [Base] = 1.
   [Base] = 1 - [Ácido].
   Substitua isso na razão e resolva:
   [Base] = 0,523 moles/L.
   Agora resolva para [Acid]: [Base] = 1 - [Acid], então [Acid] = 0,477 moles/L.
4. Prepare a solução misturando 0,477 moles de fosfato monossódico e 0,523 moles de fosfato dissódico em pouco menos de um litro de água.
5. Verifique o pH usando um medidor de pH e ajuste o pH conforme necessário usando ácido fosfórico ou hidróxido de sódio.
6. Depois de atingir o pH desejado, adicione água para trazer o volume total de tampão de ácido fosfórico para 1 L.
7. Se você preparou este buffer como um solução estoque , você pode diluí-lo para formar tampões em outras concentrações, como 0,5 M ou 0,1 M.

Vantagens e Desvantagens dos Tampões de Fosfato

As duas principais vantagens dos tampões de fosfato são que o fosfato é altamente solúvel em água e possui uma capacidade de tamponamento extremamente alta. No entanto, estes podem ser compensados ​​por certas desvantagens em algumas situações.

• Os fosfatos inibem as reações enzimáticas.
• O fosfato precipita em etanol, portanto não pode ser usado em preparações para precipitar DNA ou RNA.
• Fosfatos sequestram cátions divalentes (por exemplo, Ca²⁺e Mg²⁺).